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Identification et caractérisation d`une protéine recombinante B-galactosidase / Est.R1 codant pour un antigène de sporozoïte d`Eimeria stiedae (Coccidiose de lapin)

La coccidiose est une maladie d`une importance économique majeur chez le lapin pour le développement de vaccin par la technique du génie - génétique dirigé contre les coccidies. Une banque d`AND génomique d`Eimeria stiedae a été construite le vecteur d`expression ?gt II. Le criblage de l a banque avec un antisérum de lapin dirigé contre les sporozoïtes d`E.stiedae a identieé les recombinants exprimant des antigènes d`E.stiedae. Sur 3 clones recombinants identifiés, un clone (Est.R1)positif a été choisi pour une analyse plus approfondie. Ce clone génomique contient un insert / EcoRI de 1200 pb. La séquence de ce fragment a décelé une phase ouverte de lecture de 741 , nucléotides qui débute à partir du site EcoRI et correspondant à une protéine de poids moléculaire de 27,5 Kd. L`antisérum dirigé contre la protéine de fusion Ø-galactosidase reconnaît une protéine de 40 Kd, sur des extraits d`antigènes d`oocystes sporulés et non sporulés dEstiedae, et sur des oocystes sporulés d`Eimeria magna et d`Eimeria intestinalis. Une protéine de plus haut poids moléculaire (45 Kd)est détectée chez Eimeria tenella (parasite du poulet). L`analyse de l`immunofluorescence indirect a montré que cet antigène est localisé dans la région membranaire interne du sporozoïte E.stiedae et au niveau du corps réfringent chez E.magna et E.intestinalis.L`analyse de la séquence incomplète n`a révélé aucune homologie avec les séquences existantes dans les banques de données (Swiss-Prot, PC / geene et GCG software).


 
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